esarcsenfrdeiwhiitpt

Iskorjenjivanje MRSA pomoću klorovog dioksida

MRSAInfekcije otporne na antimikrobne lijekove (AMR) trenutno oduzimaju najmanje 50.000 15 života svake godine samo u Europi i SAD -u, a još stotine tisuća drugih umire u drugim područjima svijeta. U 10 europskih zemalja više od XNUMX% infekcija Staphylococcus aureus u krvotoku uzrokovano je sojevima rezistentnim na meticilin (MRSA),

a neke od ovih zemalja bilježe stope otpora blizu 50%. 1 Nadalje, dok se broj infekcija rezistentnih na antibiotike povećava, broj novih antibiotika se smanjuje. 1,2 Stoga je imperativ tražiti nove i nove tretmane za ARS, a ovo je premisa ovog istraživanja: koristiti prirodne tvari za iskorjenjivanje MRSA, koje ne stvaraju daljnju rezistenciju. Klor dioksid koji se koristi in vitro, bio je naš glavni fokus ovog istraživanja, budući da je bio najučinkovitiji, u usporedbi s drugim ispitivanim prirodnim tvarima.

Ključne riječi: sojevi otporni na antibiotike, otporni na meticilin, Staphylococcus aureu,

sindrom toksičnog šoka, eritromicin, klor dioksid

 

Kratice: MRSA, Staphylococcus aureus otporan na meticilin; AMR. otporan na antimikrobne tvari; TSST-1, sindrom toksičnog šoka toksina-1; Cl2, Klor dioksid, PVL, Panton-Valentine Leukocidin; MSSA, safilokok aureus osjetljiv na meticilin

 

I

Bolničke infekcije stečene u bolnicama ili na intenzivnim odjeljenjima često su uzrokovane bakterijama otpornim na antibiotike, poput stafilokoka aureusa otpornog na meticilin (MRSA). Ovu rezistenciju na antibiotike prati visoka stopa morbiditeta, mortaliteta i visoka cijena zdravstvenih ustanova.

Što je MRSA?

Staphylococcus aureus je gram-pozitivan kokos koji je i katalaza i koagulaza +. Staphylococcus aureus razvio se kako bi razvio brojne strategije izbjegavanja imunološkog sustava za borbu protiv smrti uzrokovane neutrofilima, uključujući aktivaciju neutrofila, migraciju na mjesto infekcije, opsonizaciju bakterija, fagocitozu i kasnije uništavanje posredovano neutrofilima. Poznato je do 40 imunološki izbjegavajućih molekula S. aureus i identificiraju se nove funkcije ovih proteina koji izbjegavaju.

Proizvode razne toksine, uključujući alfa-toksin, beta-toksin, gama-toksin, delta-toksin, piling, enterotoksine, leukocidin Panton-Valentine (PVL) i toksični sindrom toksičnog šoka 1 (TSST-1); enterotoksini i TSST-1 povezani su sa sindromom toksičnog šoka; Progresivna multifokalna leukoencefalopatija povezana je s nekrotičnim infekcijama kože i pluća i važan je faktor virulencije za upalu pluća i osteomijelitis. 3

S. aureus izražava širok raspon čimbenika virulencije, uključujući

toksini (hemolizini i leukocidini), površinski imunoevazivni čimbenici (npr. kapsula i protein A) i enzimi koji potiču invaziju tkiva (npr. hijaluronidaza). 3

Kolonizacija MRSA -om povećava rizik od infekcije, a infektivni sojevi podudaraju se s kolonizirajućim sojevima u 50-80% slučajeva. 4,5

Gotovo sve što je u dodiru s kožom može poslužiti kao izvor prenošenja MRSA -e, od kaputa i bijelih kravata do olovaka i mobitela.

Kolonizacija može trajati dugo. MRSA također može opstati u kućnom okruženju, komplicirajući pokušaje iskorjenjivanja. 6

Istodobno, kolonizacija nije statična, jer je utvrđeno da se sojevi razvijaju, pa čak i zamjenjuju unutar istog domaćina. 7

 

Otpornost na lijekove

MRSA je u više navrata stekla MGE koji nosi gene rezistencije na antibiotike. Otpornost na penicilin (blaZ), trimetoprim (dfrA i dfrK), eritromicin (ermC), klindamicin (konstitutivno izražen ermC) i tetracikline (tetK i tetL) identificirani su u insercijskim nizovima, transpozonima, a ponekad i plazmidima u oba MRSA, kao u meticilin. Osjetljiv Staphylococcus aureus (MSSA). 8 Vjerojatno odražavajući snažne selektivne pritiske u bolničkim uvjetima, rezistencija na antibiotike često je genetski povezana s otpornošću na dezinficijense ili teške metale (npr. Spojevi četvrtastog amonijaka, živa ili kadmij) među sojevima HA-MRSA. 9

Što je klorov dioksid?

Sada komercijalno važan spoj klorov dioksid (ClO 2) nije nedavno otkriće. Plin je prvi proizveo Humphrey Davy 1811. reakcijom klorovodične kiseline s kalijevim kloratom. Tako je nastao "euklor", kako su ga tada zvali. Watt i Burgess, koji su izumili alkalno izbjeljivanje pulpe 1834, spomenuli su euklor kao sredstvo za izbjeljivanje u svom prvom patentu. 10,11

Klor dioksid kasnije je postao poznat kao izbjeljivač, a kasnije i dezinficijens. Međutim, proizvodnja ClO 2 iz mineralnog klorata je lukava, a plin je eksplozivan pa ne može

mogu se lako koristiti praktički do proizvodnje natrijevog kloritnog praha od strane Olin Corporation 1940.

Klor dioksid bi se sada mogao osloboditi iz soli klorita kad je potrebno. U općinskim vodoopskrbama to se obično radi dodavanjem klora u otopinu klorita, a u laboratoriju dodavanjem kiseline u otopinu klorita. Alliger je 1978., 10,11
Pojedinačni korisnik može lokalno primijeniti ClO 2.

 

ClO2 je mala molekula molekulske mase 67,46 i tvori stabilan radikal. 12 ClO2 je oksidant, koji se reducira u kloritni ion (ClO 2 -) hvatanjem elektrona (ClO 2 + e- → ClO 2 -). Redoks potencijal (Eº) relativno je visok kao 0,95 V, pa ne šteti ljudskom mikrobiomu. 13,14

 

Otopina klorov dioksida (ClO2)

Klor dioksid je: baktericidan, virucidan, sporicidan, cisticidan, algaecidan i fungicidan. 15 Klor dioksid, snažan oksidant, inhibira ili uništava mikroorganizme u koncentracijama u rasponu od 1 do 100 ppm koji proizvode snažno antivirusno djelovanje, inaktivirajući> ili = 99,9% virusa s tretmanom od 15 sekundi senzibilizacije.
15-19

Nadalje, ClO 2 može brzo ukloniti biofilmove 20 jer je vrlo topljiv u vodi i, za razliku od ozona, ne reagira s
izvanstanični polisaharidi iz biofilma. Na taj način ClO 2 može brzo prodrijeti u biofilmove kako bi dosegao i ubio mikrobe koji žive u filmu: velika prednost koja se razlikuje od adresiranja za Natural
i alopatska medicina. Postoje brojni izvještaji da otopina ClO2 ima virucidno djelovanje. 21-25 Koncentracija inaktivacije protiv

različiti virusi su 1-2 ppm u poliovirusu. 21,22 2,19 ppm u koronavirusu koji uzrokuje SARS. 23 7.5 ppm u virusu hepatitisa A, 24 i 0,2 ppm u rotavirusu. 25

Sigurnost klorovog dioksida

Mnoga su ispitivanja pokazala da su ClO 2 netoksični spojevi. Pet desetljeća uporabe nije pokazalo nikakve štetne učinke na zdravlje.

Glavna područja uporabe bila su dezinfekcija zaliha vode, uklanjanje neželjenih okusa i mirisa te izbjeljivanje u industriji celuloze, papira i tekstila.

Toksikološki testovi uključuju gutanje ClO 2 u vodi za piće, dodavanje kulture tkiva, injekcije u krv, sjemenke
dezinfekcija, 26,27 dezinfekcija jaja insekata, injekcije ispod kože životinja i u mozak miševa, opekline na više od 1500 štakora i injekcije u stabljike biljaka. Standardni testovi uključuju Ames mutaciju, kineskog hrčka, oko zeca, abraziju kože, farmakodinamiku i teratologiju. 28

U jednoj studiji, dobrovoljci su pili ClO2 ili ClO2 ¯ u otopini do 24 ppm i nisu pokazali štetne učinke. 28

Nekoliko je studija ispitivalo učinke na reproduktivnu toksičnost ili teratologiju. Nema dokaza o fetalnim malformacijama ili rođenju.
nedostaci u koncentracijama ClO 2, i u piću i na koži, do 100 ppm. 29-31 (prikaz, stručni)

S produljenim hranjenjem, toksičnost se javlja uglavnom u crvenim krvnim stanicama. Štakori hranjeni 1000 mg / l kronično 6 mjeseci nisu pokazali značajne hematološke promjene. Međutim, nakon 9 mjeseci, broj crvenih krvnih stanica, hematokrit i hemoglobin su se smanjili u svim skupinama liječenja.

Nedostatak dugoročne toksičnosti, ali niska razina osnove dramatično je ilustrirana u dvije odvojene studije u kojima su 32 štakora i 33 pčele dvije godine hranjene visokim dozama ClO2. Nisu primijećeni nikakvi štetni učinci s dodavanjem do 100 ppm u vodoopskrbu.

Materijali i metode

U ovom istraživanju korišten je Staphylococcus aureus otporan na meticilin (MRSA), uzgojen na pločama s krvnim agarima, koje je osigurao lokalni certificirani klinički laboratorij.

MRSA kultura

U ormaru sigurnosne klase 2, s ploča s krvnim agarima (kolumbijski agar), uzet je uzorak MRSA iz izoliranih kultura pomoću sterilizirane petlje i stavljen u sterilne epruvete s 5 ml triptičke sojine juhe (TSB). Ove epruvete za kulturu inkubirane su na 37 stupnjeva Celzijusa 48 sati. Ove epruvete za kulturu mogle bi se čuvati u hladnjaku na 4 stupnja Celzijusa do 10 dana, za što bi se opet napravili uzorci.

Brojanje bakterija

Jedna od najčešćih metoda za kvantificiranje bakterija je prebrojavanje jedinica koje stvaraju kolonije (CFU). Ova široko korištena metoda je jednostavna, daje dobru opću ideju o vitalnosti stanica i osjetljiva je čak i na niske koncentracije bakterija.

Jedan veliki nedostatak je to što su potrebni dani za postizanje rezultata koji su u najboljem slučaju procjene. Kolonija može nastati iz jedne ili tisuće stanica, a priprema uzoraka može varirati od tehnologije do tehnologije, kao i svaki put, ovisno o uvjetima uzorka. Radi preciznosti, u ovom je istraživanju korišten brojač mikrobnih stanica QUANTOMTx tvrtke Logos Biosystems (logosbio.com). To je automatizirani brojač stanica zasnovan na slici koji može identificirati i prebrojati pojedinačne bakterijske stanice u nekoliko minuta.

QUANTOM Tx automatski fokusira, snima i analizira više stanica obojenih fluorescencijom radi otkrivanja bakterijskih stanica s visokom osjetljivošću i preciznošću. Sadrži sofisticirani algoritam za otkrivanje i uklanjanje stanica koji može točno identificirati pojedinačne bakterijske stanice čak i u najmanjim skupinama. U tim pokusima koristimo komplet za bojenje staničnih ćelija za otkrivanje živih ili održivih stanica.

Kvantni brojač mikrobnih stanica uspoređen je i utvrđeno je da je točan kao mjerenja protočnom citometrijom i hemocitometrom, ali uvelike skraćuje vrijeme jer svako brojanje ne traje više od 30 sekundi i može razlikovati skupine. Obojene stanice pomiješane su s QUANTOM I spremištem za učitavanje stanica, učitane na stakalca za brojanje stanica QUANTOM M50 i centrifugirane u centrifugi QUANTOM radi imobilizacije i ravnomjerne distribucije stanica duž jedne žarišne ravnine kako bi se osigurala dosljedna i precizna detekcija stanica. Brojanje rezultata i slika može se pregledati i spremiti odmah nakon brojanja.

Za pripremu uzorka za Quantom, uzeto je 10 mikrolitara (ul) medija za kulturu pomoću prethodno umjerene DLAB elektroničke pipete i stavljeno u sterilnu Eppendorfovu epruvetu od 1,5 ml. Tome je dodano 2 ul održive boje za bojenje stanica i inkubirano u Heraeus inkubatoru na 37 stupnjeva Celzijusa 30 minuta. Ovom uzorku dodano je 8 ul pufera za pojačavanje fluorescentnog signala. Kako bismo uštedjeli na Quantom potrošnim slajdovima, recikliramo ih pranjem u Imrali Inventions iWash® sustavima za čišćenje slajdova (www.imraliinventions.com).

Je li tim epruvetama dodan klor -dioksid u različitim koncentracijama, za različito trajanje? Koncentracija klor dioksida bila je u rasponu od 0,5 µl (0,5 ppm) do 5 µl (5 ppm), a trajanje izlaganja uzorku bilo je od 30 minuta do 30 sekundi.

Za svaki pokus temeljen na vremenu i trajanju, pripremljene su dvije epruvete za uzorke kako bi se faktor razrjeđenja održao konstantnim. Ovisno o količini klor dioksida dodanog u pokusnu epruvetu, u kontrolnu epruvetu dodana je ista količina vode.

Iz ovih kontrolnih i eksperimentalnih epruveta, 6 µl uzorka uzeto je elektroničkom pipetom i stavljeno na stakalca s brojem stanica M50. Stakalci su stavljeni u QUANTOM centrifugu 8 minuta na 300 RCF (relativna centrifugalna sila), a zatim su stavljeni u brojač mikrobnih stanica Quantom kako bi se izvršilo referentno mjerenje (kontrola) i drugo mjerenje iz eksperimentalne epruvete.

Optimalna konfiguracija brojača Quantom Microbial Cell Counter za MRSA protokol koju smo pronašli tijekom testa utvrđena je u Faktoru razrjeđivanja 2, Minimalna veličina fluorescentnog objekta 0.4um, Maksimalna veličina fluorescentnog objekta 15μm Zaobljenost 50%, Decluster razina 7 i Osjetljivost otkrivanja 7.

Priprema klorov dioksid

 

Tradicionalni klor -dioksid, nazvan MMS, pripremljen je kao tradicionalni klor -dioksid, nazvan MMS, pripremljen je kao otopina pomoću dvije komponente, otopine natrijevog klorita (25% -tna otopina u vodi) i 4% -tne otopine klorovodične kiseline. Jedna kap iz svake od ovih otopina stavljena je u sterilnu epruvetu od 1,5 ml Eppendorfa i ostavljena da se aktivira 30 sekundi. Osim toga, provedeno je više eksperimenata korištenjem nove generacije klor dioksida pod nazivom CDSplus, vlasnički proizvod koji je proizveo Aquarius Pro-Life kao proizvod za pročišćavanje vode. Ovo je puferirani oblik klor dioksida pri standardnom pH 7 i koncentraciji od 3000 ppm kada je aktivan (250 ml). Iz aktiviranog CDSplus -a (250 ml) ekstrahirano je 83 µl = 1 ppm, 166 µl = 2 ppm; 0,25 ml = 3 ppm.

 

Eksperimentalni protokoli

Različite koncentracije klor dioksida

Korišteni su MMS i CDSplus. Raspon je bio od 1 ppm do 5 ppm. Korišteno je vrijeme MMS -a i CDSplus -a. Raspon je bio od 1 ppm do 5 ppm. Vrijeme izlaganja klorovom dioksidu kretalo se od 30 minuta do 30 sekundi. U početnim pokusima nije bilo jasno koliko će vremena biti potrebno za inhibiciju, ali brzo se pokazalo da je izloženost manja od minute. Većina eksperimenata je stoga imala vrijeme izlaganja 1 minutu.

Rezultati Početni pokusi

Počeli smo uzimati različite koncentracije klor -dioksida u tradicionalnom MMS -u i testirali te koncentracije s MRSA u otopini za različita vremena u rasponu od 30 minuta do 30 sekundi. 1μl klor dioksida ekvivalentno je koncentraciji od 1 ppm. Najniža koncentracija klor dioksida korištena za potpuno iskorjenjivanje MRSA u ovim pokusima bila je 0,5 ppm, s vremenom izlaganja 30 sekundi.

Tablica 1 u nastavku prikazuje različite koncentracije u ovisnosti o vremenu, pri čemu je koncentracija MRSA stanica mjerena Quantom brojačem stanica. Kao što vidite, za sve koncentracije klor dioksida u rasponu od 1 do 5 ppm i vrijeme izlaganja od 30 minuta do 30 sekundi, inhibicija rasta MRSA bila je 99,99% tijekom svih ovih pokusa.

 

Tablica 1 Usporedba broja bakterija prije i poslije izlaganja klorov dioksidu.

 

Pokus 1

Tablica 2 prikazuje broj stanica za 6 korištenih koncentracija klor dioksida, naime: 0,5, 1, 2, 3, 4 i 5 ppm i korišteno je osnovno stanje za svaku koncentraciju. Eksperiment broj 0 je osnovni (kontrolni) broj za svaku eksperimentalnu skupinu koja koristi različite koncentracije klor dioksida. Za svaku koncentraciju pokus se ponovio 5 puta, s navedenim srednjim koncentracijama.

Od početnih pokusa, budući da je utvrđeno da klor dioksid ubija 99,99% MRSA bakterija u koncentracijama od 5 ppm na samo 30 sekundi, svi drugi pokusi su kao standard koristili vrijeme izlaganja od jedne minute, dok su pokušavali s različitim koncentracijama.

U ovom pokusu koncentracije ClO2 kreću se od 0,5

  • Uzimano je 5 stranica u minuti, koristeći tradicionalni MMS. Kod svake od 5 koncentracija, stopa inhibicije bila je 100%; pogledajte tablicu 2 i sliku
  1. Slika 1 prikazuje ponovljivost broja bakterija MRSA koristeći različite koncentracije u rasponu od 1 do 5 ppm. Za svaku koncentraciju uzeti su osnovni brojevi; to se ponovilo 5 puta. U svih 5 ponavljanja, inhibicija rasta MRSA bila je 100%.

Slika 2 uspoređuje broj stanica MRSA s koncentracijom MMS -a tijekom 1 minute. Pokriveno područje jednako je broju ćelija. Početni brojevi za svaku koncentraciju prikazani su na lijevoj strani grafikona, a konačni brojevi prikazani su na desnoj strani grafikona. Stopa inhibicije bila je 100% za sve koncentracije klor dioksida, s vremenom izlaganja 1 minutu.

 

Slika 1 Klor dioksid u različitim koncentracijama pomoću MMS -a

 

 

Slika 2 Različite koncentracije tradicionalnih MMS -a u trajanju od 1 minute.

Tablica 2 Klor dioksid (tradicionalni MMS) u različitim koncentracijama ponovljen 5 puta

 

 

Tablica 3 uspoređuje koncentracije 1, 2, 3, 4 i 5 ppm za tablicu 3 uspoređuje koncentracije 1, 2, 3, 4 i 5 ppm za 1 -minutnu izloženost klorov dioksidu. Kontrola je uspoređena s eksperimentalnom za različite koncentracije. Za sve te koncentracije klorovog dioksida, stopa inhibicije bila je 100%.

 

Pokus 2: pomoću CDSplusa

Isti prethodni pokus ponovljen je upotrebom generacije CDS plus, koristeći koncentracije od 1-3 ppm. Kod svake od 3 koncentracije, stopa inhibicije je opet bila 100%; vidjeti tablicu 4 i sliku 3. Slika 3 prikazuje eradikaciju stanica MRSA korištenjem različitih koncentracija CDSplus -a, naime 1, 2 i 3 ppm. Za kontrolnu skupinu izmjeren je početni broj, a zatim je svaka koncentracija CDS plus dodana i ponovljena dva puta.

Za sve koncentracije stopa inhibicije bila je 100%.

Tablica 4 uspoređuje koncentracije od 1, 2 i 3 pp za 60 sekundi izlaganja klorov dioksidu, koristeći novu generaciju CDS plus.

Kontrola je uspoređena s eksperimentalnom za različite koncentracije.

 

Slika 3 MRSA-CDSPlus s različitim koncentracijama.

 

Slika 4 uspoređuje broj stanica MRSA s koncentracijom klor dioksida (CDS plus) tijekom 1 minute. Gornji redak prikazuje referentni broj ćelija za kontrolnu skupinu. Zaključak prikazuje broj stanica MRSA nakon izlaganja stanica 1 minutu različitim koncentracijama klor dioksida; stopa inhibicije bila je 100%.

 

 

Slika 4 Različita koncentracija CDSPlus -a tijekom 60 sekundi.

Tablica 4 Klor dioksid (CDSplus) u različitim koncentracijama za 1 -minutnu izloženost Tablica 4 Klor -dioksid (CDSplus) pri različitim koncentracijama za 1 -minutnu izloženost

 

Zaključci

MRSA je svestran i nepredvidljiv. Njihova genetska prilagodljivost i MRSA svestrani su i nepredvidljivi. Njegova genetska prilagodljivost i serijski izgled uspješnih epidemijskih sojeva znače da ostaje velika prijetnja ljudskom zdravlju.

Ustrajno visok mortalitet povezan s invazivnom MRSA infekcijom, unatoč činjenici da je FDA odobrila više antibiotika učinkovitih protiv MRSA od 2014. godine, naglašava potrebu za visokokvalitetnim ispitivanjima kako bi se utvrdilo optimalno liječenje za te pacijente. U tim in vitro pokusima dosljedno se dokazivala učinkovitost klorovog dioksida protiv MRSA, s inhibicijom rasta od 99,99% -100% čak i pri najmanjim koncentracijama od 0,5 ppm.

S obzirom na dosadašnju dokazanu sigurnost klor-dioksida u pokusima na životinjama i ljudima, postoji hitna potreba za visokokvalitetnim kliničkim ispitivanjima kako bi se utvrdila djelotvornost klor-dioksida kod osoba zaraženih MRSA-om danas.

Te će studije provesti klinička zajednica, počevši od pojedinačnih kliničkih ispitivanja u različitim zemljama svijeta, stvaranjem mreže kliničkih ispitivanja za prikupljanje svih podataka i razvoj sigurnih i učinkovitih kliničkih protokola. Što se tiče sigurnosti, u pomno osmišljenom eksperimentu utvrđeno je da je karakteristično vrijeme potrebno za ubijanje mikroba samo nekoliko milisekundi. Kako je ClO2 prilično hlapljiv spoj, njegovo vrijeme kontakta (postojanost na tretiranoj površini) ograničeno je na nekoliko minuta.

Iako je ovaj boravak dovoljno siguran (barem 3 reda veličine dulji od vremena smrti) da inaktivira sve bakterije u
površina tijela je prekratka da ClO 2 prodre dublje od nekoliko desetina milimetra; stoga ne može nanijeti nikakvu stvarnu štetu organizmu koji je mnogo veći od bakterije. 

 

Postoje i brojna svjedočanstva o upotrebi klora dioksida od strane dobrovoljaca za iskorjenjivanje mnogih zaraznih bolesti, uključujući malariju i HIV, ali jedan od pionira u Africi, Jim Humble. Mnogo je kontroverzi oko ovih anegdotskih dokaza, ali se ne može zanemariti broj svjedoka koji svjedoče: politika i osobni interesi moraju biti ostavljeni po strani, a znanost mora ispitati dokaze u korist čovječanstva! 34,35

 

Reference i izvorni dokument sa sljedeće poveznice:

 

MRSA

pdf

Iskorjenjivanje MRSA pomoću klorovog dioksida

Veličina: 651.44 KB
Učitavanja: 2056
Datum dodan: 25-08-2021
pdf

Iskorjenjivanje MRSA pomoću klorovog dioksida.en.es

Veličina: 1.28 MB
Učitavanja: 875
Datum dodan: 25-08-2021


zakonitost

Preporučene poveznice

kontakt

Ako želite, možete me kontaktirati putem e-pošte za sve ostale podatke koji se ne pojavljuju na ovom web mjestu.

najnovije vijesti

Društvene mreže

Zbog višestrukih cenzura koje su primale društvene mreže i video platforme, ovo su mogućnosti za širenje dostupnih informacija

Novosti

Ako imate pitanja u vezi s klorovim dioksidom, pristupite forumu Zabranjeno zdravlje koji je također dostupan na Android aplikacija.

Obavezno se pretplatite na naš bilten na željenom jeziku da biste dobivali važne obavijesti povezane s terapijama klor dioksidom.

© 2022 Andreas Kalcker - Službena web stranica.