חיסול MRSA באמצעות חמצן כלור
זיהומים עמידים למיקרוביאלית (AMR) גובים כיום לפחות 50.000 נפשות מדי שנה באירופה ובארה"ב בלבד, ועוד מאות אלפים נוספים מתים באזורים אחרים בעולם. ב -15 מדינות באירופה, יותר מ -10% מהזיהומים בסטפילוקוקוס אאורוס בזרם הדם נגרמים על ידי זנים עמידים בפני מתיצילין (MRSA),
וכמה ממדינות אלה רושמות שיעורי התנגדות הקרובים ל -50%. יתר על כן, בעוד שמספר הזיהומים העמידים לאנטיביוטיקה גדל, מספר האנטיביוטיקה החדשה יורד. 1 לכן, יש צורך בטיפולים חדשים וחדשים עבור ADR, וזוהי הנחת היסוד של מחקר זה: שימוש בחומרים טבעיים למיגור MRSA, שאינם יוצרים עמידות נוספת. כלור דו חמצני המשמש במבחנה, היה המוקד העיקרי שלנו במחקר זה, מכיוון שהוא היה היעיל ביותר בהשוואה לחומרים טבעיים אחרים שנבדקו.
מילות מפתח: זנים עמידים למיקרוביאלית, עמידים בפני מתיצילין, סטפילוקוקוס אאורו,
תסמונת הלם רעיל, אריתרומיצין, כלור דו חמצני
קיצורים: MRSA, Staphylococcus aureus עמיד בפני מתילצילין; AMR. עמיד למיקרוביאלית; TSST-1, תסמונת הלם רעיל toxin-1; ClO 2, כלור דו חמצני, PVL, פנטון ולנטיין לוקוסידין; MSSA, סאפילוקוקוס אאורוס רגיש למתצילין
מבוא
זיהומים נוזוקומיאליים הנרכשים בבתי חולים או טיפול נמרץ נגרמים לעיתים קרובות על ידי חיידקים עמידים לאנטיביוטיקה, כגון סטפילוקוקוס אאורוס (MRSA). עמידות זו לאנטיביוטיקה מלווה בשיעורי תחלואה גבוהים, תמותה ועלות גבוהה של מתקני בריאות.
מהו MRSA?
סטפילוקוקוס אאורוס הוא קוקוס חיובי גרם שהוא קטלאז וגם קואגולאז +. Staphylococcus aureus התפתח לפיתוח אסטרטגיות רבות להימנעות ממערכת החיסון למאבק במוות בתיווך נויטרופילים, כולל הפעלה של נויטרופילים, הגירה לאתר ההדבקה, אופסוניזציה חיידקית, פגוציטוזיס והרס בתיווך נויטרופילים לאחר מכן. ידועים עד 40 מולקולות מסוג S. aureus להתחמק מהחיסון, ומזהים פונקציות חדשות לחלבונים מתחמקים אלה.
הם מייצרים מגוון רעלים, כולל אלפא רעלן, בטא טוקסין, רעלן גמא, דלתא רעלן, אקספוליאטין, אנטרוטוקסינים, פנטון ולנטיין לויקוצידין (PVL) ותסמונת הלם הרעיל טוקסין 1 (TSST-1); אנטרוטוקסינים ו- TSST-1 קשורים לתסמונת הלם רעיל; לוקואנסצפלופתיה רב -מוקדית מתקדמת קשורה לזיהומים נמקיים של העור והריאות ומהווה גורם ויראלי חשוב לדלקת ריאות ואוסטאומיאליטיס. 3
S. aureus מבטא מגוון רחב של גורמי ארסיות, כולל
רעלים (המוליסינים ולוקוצידינים), גורמי משטח חיסוניים (כמו כמוסה וחלבון A), ואנזימים המקדמים פלישת רקמות (למשל היאלורונידאז). 3
קולוניזציה על ידי MRSA מגבירה את הסיכון לזיהום, והדבקה של זנים עולה בקנה אחד עם זנים מתיישבים עד 50-80% מהמקרים. 4,5
כמעט כל דבר במגע עם העור יכול לשמש כפומייט בהעברת MRSA, החל ממעילים וקשרים לבנים ועד עטים וטלפונים סלולריים.
ההתיישבות יכולה להימשך לאורך זמן. MRSA יכול להתמיד גם בסביבה הביתית, ולסבך את ניסיונות הביעור. 6
יחד עם זאת, ההתיישבות אינה סטטית, שכן נמצאו זנים המתפתחים ואף מתחלפים בתוך אותו מארח. 7
עמידות לתרופות
MRSA רכשה MGE הנושא גנים העמידים לאנטיביוטיקה במספר הזדמנויות עצמאיות. עמידות בפניצילין (blaZ), trimethoprim (dfrA ו- dfrK), אריתרומיצין (ermC), קלינדמיצין (מבוטא באופן מהותי ermC) וטטרציקלינים (tetK ו- tetL) זוהו ברצפי החדרה, טרנספוזונים ולפעמים פלסמידים בשני MRSA כמו ב- מתצילין. רגיש ל- Staphylococcus aureus (MSSA). 8 כנראה המשקפת את הלחצים הסלקטיביים החזקים במסגרת בית החולים, עמידות לאנטיביוטיקה קשורה לעיתים קרובות גנטית לעמידות לחומרי חיטוי או מתכות כבדות (למשל, תרכובות אמוניה רבעוניות, כספית או קדמיום) בקרב זני HA-MRSA. 9
מהו כלור דו חמצני?
התרכובת החשובה מבחינה מסחרית של כלור דו חמצני (ClO 2) אינה תגלית עדכנית. הגז הופק לראשונה על ידי המפרי דייווי בשנת 1811 על ידי תגובה של חומצה הידרוכלורית עם אשלגן כלור. זה ייצר "euchlorine", כפי שנקרא אז. וואט ובורגס, שהמציאו הלבנת עיסת אלקליין בשנת 1834, הזכירו את אאכלורן כסוכן הלבנה בפטנט הראשון שלהם. 10,11
מאוחר יותר נודע כלור דו חמצני בשם אקונומיקה ובהמשך כחומר חיטוי. אולם ייצור ה- ClO 2 מהמינרל כלורט מסובך, והגז נפץ ולכן הוא לא יכול
ניתן להשתמש בהם כמעט עד לייצור אבקת נתרן כלוריט על ידי תאגיד Olin בשנת 1940.
כעת ניתן לשחרר כלור דו חמצני בעת הצורך ממלח הכלוריט. באספקת המים העירונית, הדבר נעשה בדרך כלל על ידי הוספת כלור לתמיסת הכלוריט ובמעבדה על ידי הוספת חומצה לתמיסת הכלוריט. אליגר הראה בשנת 1978, 10,11 זאת
המשתמש היחיד יכול ליישם ClO 2 באופן מקומי.
ClO 2 היא מולקולה קטנה עם משקל מולקולרי של 67,46 ויוצרת רדיקל יציב. 12 ClO 2 הוא חמצון, המצטמצם ליון כלורי (ClO 2 -) על ידי לכידת אלקטרון (ClO 2 + e- → ClO 2 -). פוטנציאל החמצון (Eº) גבוה יחסית ל- 0,95 V, כך שהוא אינו פוגע במיקרוביום האנושי. 13,14
פתרון כלור דו חמצני (ClO2)
כלור דו חמצני הוא: חיידקים, וירוסידאליים, ספורצידאליים, ציסטיצידים, אלגצידים ופטריות. דווח כי כלור דו חמצני, חמצון חזק, מעכב או הורס מיקרואורגניזמים בריכוזים שנעים בין 15 ל -1 עמודים לדקה, המייצרים פעילות אנטי -ויראלית עוצמתית, המנטרלת> 100% מהנגיפים בטיפול ברגישות של 99,9 שניות.
15 19 XNUMX
יתר על כן, ClO 2 יכול להסיר biofilms במהירות 20 מכיוון שהוא מסיס מאוד במים, ובניגוד לאוזון, אינו מגיב עם
רב -סוכרים חוץ -תאיים מביופילם. בדרך זו ClO 2 יכול לחדור לביופילמים במהירות כדי להגיע ולהרוג את החיידקים החיים בתוך הסרט: יתרון גדול השונה מלהתייחס לשניהם עבור Natural
ורפואה אלופטית. ישנם דיווחים רבים שלפתרון ClO 2 יש פעילות וירוסידית. 21-25 ריכוז ההשבתה נגד
וירוסים שונים הם 1-2 עמודים לדקה בפוליו-וירוס. 21,22 2,19 עמודים לדקה בנגיף הקורונה הגורם ל- SARS. 23 7.5 עמודים לדקה בנגיף הפטיטיס A, 24 ו -0,2 עמודים לדקה בנגיף הרוטה. 25
בטיחות כלור דו חמצני
הערכות רבות הראו כי תרכובות לא רעילות של ClO 2. חמישה עשורים של שימוש לא הצביעו על השפעות בריאותיות שליליות.
תחומי השימוש העיקריים היו חיטוי אספקת מים, הסרת טעמים וריחות לא רצויים והלבנה בתעשיות העיסה והנייר והטקסטיל.
בדיקות הטוקסיקולוגיה כוללות בליעה של ClO 2 במי שתייה, תוספות לתרבית רקמות, זריקות לדם, זרעים
חיטוי, 26,27 חיטוי של ביצי חרקים, זריקות מתחת לעור של בעלי חיים ומוח של עכברים, כוויות הניתנות ליותר מ- 1500 חולדות וזריקות לגבעולי צמחים. הבדיקות הסטנדרטיות כוללות מוטציה של איימס, אוגר סיני, עין ארנבת, שחיקה בעור, פרמקודינמיקה וטרטולוגיה. 28
במחקר אחד, מתנדבים אנושיים שתו ClO 2 או ClO 2 ¯ בתמיסה של עד 24 עמודים לדקה ולא הראו השפעות שליליות. 28
מספר מחקרים בחנו את ההשפעות על רעילות הרבייה או הטרטולוגיה. אין עדות למום עוברי או לידה.
פגמים בריכוזי ClO 2, הן במשקה והן במסלול העור, עד 100 עמודים לדקה. 29-31
עם האכלה ממושכת, הרעילות מתרחשת בעיקר בכדוריות הדם האדומות. חולדות שהוזנו 1000 מ"ג / ליטר כרונית במשך 6 חודשים לא הראו שינויים המטולוגיים משמעותיים. עם זאת, לאחר 9 חודשים, ספירת תאי הדם האדומים, המטוקריט והמוגלובין ירדה בכל קבוצות הטיפול.
היעדר רעילות לטווח ארוך, אך הבסיס ברמה נמוכה מתואר באופן דרמטי בשני מחקרים נפרדים בהם ניזונו 32 חולדות ו -33 דבורים ל- ClO2 במינון גבוה במשך שנתיים. לא נצפו השפעות מזיקות כאשר עד 100 עמודים לדקה נוספו לאספקת המים.
חומרים ושיטות
במחקר זה נעשה שימוש ב- Staphylococcus aureus עמיד בפני מתילצילין (MRSA), שגדל על צלחות אגר דם, שסופקו על ידי מעבדה קלינית מוסמכת מקומית.
תרבות MRSA
בארון סוג בטיחות 2, מלוחות אגר הדם (אגר קולומביאני), נלקחה דגימת MRSA מתרבויות מבודדות באמצעות לולאה מעוקרת והונחה בצינורות סטריליים עם 5 מ"ל של מרק סויה טריפטי (TSB). צינורות תרבות אלה הודגרו בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 48 שעות. ניתן לאחסן צינורות תרבות אלה במקרר בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס למשך עד 10 ימים, ושוב יתבצעו דוגמאות.
ספירת חיידקים
אחת השיטות הנפוצות ביותר לכימות חיידקים היא ספירת יחידות יוצרות מושבות (CFU). שיטה זו בשימוש נרחב היא פשוטה, נותנת מושג כללי טוב על כדאיות התא, ורגישה אפילו לריכוזים נמוכים של חיידקים.
חיסרון אחד גדול הוא שלוקח ימים להגיע לתוצאות שהן אומדנים במקרה הטוב. מושבה יכולה לנבוע מאחד או אלף תאים והכנת הדגימה יכולה להשתנות מטכנולוגיה לטכנולוגיה, כמו גם בכל פעם, בהתאם לתנאי הדגימה. לשם הדיוק, נעשה שימוש בחקירה זו מונה התא החיידקי QUANTOMTx מבית Logos Biosystems (logosbio.com). זהו מונה תאים אוטומטי המבוסס על תמונה שיכול לזהות ולספור תאים חיידקיים בודדים תוך דקות.
ה- QUANTOM Tx מתמקד, לוכד ומנתח אוטומטית תמונות תאים מוכתמות פלואורסצנטיות כדי לזהות תאים חיידקיים ברגישות ודיוק גבוהים. הוא מכיל אלגוריתם מתוחכם לזיהוי והסרה של תאים שיכול לזהות במדויק תאי חיידקים בודדים אפילו בקבוצות הקטנות ביותר. בניסויים אלה, אנו משתמשים בערכת צביעת תאים קיימא לאיתור תאים חיים או קיימא.
המדד של תאי מיקרוביאלית קוואנטום הושווה ונמצא מדויק כמו מדידות זרימת זרימה ומדידות hemocytometer, אך מקטין מאוד את הזמן מכיוון שכל ספירה אורכת לא יותר מ -30 שניות ויכולה להבחין בין קבוצות. תאים מוכתמים מעורבבים עם מאגר טעינת תאים של QUANTOM I, מועלים על שקופיות ספירת תאים של QUANTOM M50 ומצנטריפוגים בצנטריפוגה QUANTOM כדי לשתק ולהפיץ תאים באופן שווה לאורך מטוס מוקד יחיד על מנת להבטיח זיהוי תאים מדויק עקבי. ניתן לצפות ולשמור ספירת תוצאות ותמונות מיד לאחר הספירה.
כדי להכין את הדגימה לקוונטום, 10 מיקרוליטר (ul) של מדיום התרבות נלקחו באמצעות פיפטה אלקטרונית DLAB שכוילה בעבר והונחה בצינור אפרילוף סטרילי 1,5 מיליליטר. לזה נוספו 2 אול של צבע מכתים תאים קיימא, ודגירה בחממה של הרעוס בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות. 8 ul של חיץ נוסף לדגימה זו כדי לשפר את אות הקרינה. כדי לחסוך בשקופיות מתכלות של Quantom, אנו ממחזרים שקופיות על ידי שטיפתן במערכות ניקוי שקופיות iWash® Imrali המצאות (www.imraliinventions.com).
האם לצינורות אלו הוסיף כלור דו חמצני בריכוזים שונים, למשך זמן שונה? ריכוז כלור דו חמצני נע בין 0,5 µl (0,5 ppm) ל 5 µl (5 ppm), ומשך החשיפה למדגם נע בין 30 דקות ל -30 שניות.
עבור כל ניסוי המבוסס על זמן ומשך, הוכנו שתי צינורות מדגם כדי לשמור על גורם הדילול קבוע. בהתאם לכמות של כלור דו חמצני הוסיף לצינור הניסוי, אותה כמות מים נוספה לצינור הביקורת.
מצינורות הבקרה והניסוי הללו, 6 µl מהדגימה נלקחה באמצעות פיפטה אלקטרונית והונחה על השקופיות של ספירת התא M50. השקופיות הונחו בצנטריפוגה QUANTOM למשך 8 דקות ב 300 RCF (כוח צנטריפוגלי יחסי) ולאחר מכן הונחו במונה התא המיקרוביאלי של Quantom כדי לבצע מדידת התייחסות (שליטה) ומדידה נוספת מצינור הניסוי.
התצורה האופטימלית של מונה התא המיקרוביאלי של Quantom לפרוטוקול MRSA שמצאנו במהלך הבדיקה נקבעה בפקטור דילול 2, גודל מינימלי של אובייקט הקרינה 0.4um, גודל מקסימלי של אובייקט ניאון 15 מיקרומטר עגולות 50%, רמת Decluster 7 ורגישות גילוי 7.
הכנת כלור דו חמצני
דו תחמוצת כלור מסורתית, הנקראת MMS, הוכנה כדו תחמוצת כלור מסורתית, הנקראת MMS, הוכנה כתמיסה באמצעות שני מרכיבים, תמיסת נתרן כלורי (25% תמיסה במים) ותמיסת חומצה כלורית 4%. טיפה אחת מכל אחת מהפתרונות הללו הונחה בצינור אפרילוף סטרילי 1,5 מ"ל ואפשרה להפעיל במשך 30 שניות. בנוסף, נערכו ניסויים נוספים באמצעות דור חדש של כלור דו חמצני בשם CDSplus, מוצר קנייני המיוצר על ידי Aquarius Pro-Life כמוצר לטיפול במים. זוהי טופס שנאגר של כלור דו חמצני ב pH סטנדרטי של 7 וריכוז של 3000 עמודים לדקה כאשר הוא פעיל (250 מ"ל). מתוך ה- CDSplus המופעל (250 מ"ל) הופקו 83 µl = 1 ppm, 166 µl = 2 ppm; 0,25 מ"ל = 3 עמודים לדקה.
פרוטוקולים ניסיוניים
ריכוזים שונים של כלור דו חמצני
שימשו MMS ו- CDSplus. הטווח היה 1 עמודים לדקה עד 5 עמודים לדקה. הזמן של MMS ו- CDSplus שימש. הטווח היה 1 עמודים לדקה עד 5 עמודים לדקה. זמן החשיפה לדו -חמצן כלור נע בין 30 דקות ל -30 שניות. בניסויים ראשוניים לא היה ברור מה הזמן שיידרש לעיכוב, אך הוכח במהירות שהוא פחות מדקה של חשיפה. לפיכך, רוב הניסויים היו בעלי זמן חשיפה של דקה אחת.
תוצאות ניסויים ראשוניים
התחלנו לקחת ריכוזים שונים של דו תחמוצת כלור ב- MMS מסורתי ובדקנו את הריכוזים הללו עם MRSA בתמיסה לזמנים שונים הנעים בין 30 דקות ל -30 שניות. 1μl של כלור דו חמצני שווה לריכוז של 1 עמודים לדקה. הריכוז הנמוך ביותר של כלור דו חמצני המשמש למיגור מוחלט של MRSA בניסויים אלה היה 0,5 עמודים לדקה, עם זמן חשיפה של 30 שניות.
טבלה 1 להלן מציגה את הריכוזים השונים כפונקציה של הזמן, כאשר ריכוז תאי MRSA נמדד על ידי מונה תאי הקוונטום. כפי שאתה יכול לראות, עבור כל ריכוזי כלור דו חמצני הנעים בין 1 ל -5 עמודים לדקה, וזמן החשיפה מ -30 דקות עד 30 שניות, עיכוב הצמיחה של MRSA היה 99,99% לאורך כל הניסויים הללו.
טבלה 1 השוואה בין ספירת חיידקים לפני ואחרי חשיפה לכלור דו חמצני.
ניסוי 1
טבלה 2 מציגה את מספרי ספירת התאים עבור 6 ריכוזי כלור דו חמצני המשמשים, כלומר: 0,5, 1, 2, 3, 4 ו -5 עמודים לדקה נעשה שימוש וספירת בסיס נמדדה עבור כל ריכוז. ניסוי מספר 0 הוא ספירת הבסיס (בקרה) עבור כל קבוצת ניסוי תוך שימוש בריכוזים שונים של כלור דו חמצני. עבור כל ריכוז, הניסוי חזר על עצמו 5 פעמים, כאשר ניתנו ריכוזים ממוצעים.
מהניסויים הראשוניים, מכיוון שנמצא כי כלור דו חמצני הורג 99,99% מחיידקי MRSA בריכוזים של 5 עמודים לדקה למשך 30 שניות בלבד, כל הניסויים האחרים השתמשו בזמן חשיפה של דקה אחת כתקן, בעוד שהם ניסו ריכוזים שונים.
בניסוי זה, ריכוזי ClO2 הנעים בין 0,5
- 5 עמודים לדקה נלקחו באמצעות ה- MMS המסורתי. בכל אחד מ -5 הריכוזים, שיעור העיכוב היה 100%; עיין בטבלה 2 ואיור
- איור 1 מראה את החוזרות של ספירת חיידקי MRSA תוך שימוש בריכוזים שונים הנעים בין 1 ל -5 עמודים לדקה. ספירה בסיסית נלקחה עבור כל ריכוז; זה חזר על עצמו 5 פעמים. בכל 5 המשכפלים, עיכוב הצמיחה של MRSA היה 100%.
איור 2 משווה את ספירת תאי MRSA לריכוז MMS במשך דקה אחת. השטח המכוסה שווה למספר ספירת התאים. הספירות הראשוניות לכל ריכוז מוצגות בצד שמאל של הגרף והספירות הסופיות מוצגות בצד ימין של הגרף. קצב העיכוב היה 1% לכל ריכוזי כלור דו חמצני, עם זמן חשיפה של דקה אחת.
איור 1 כלור דו חמצני בריכוזים שונים באמצעות MMS
איור 2 ריכוזים שונים של MMS מסורתי למשך דקה אחת.
טבלה 2 כלור דו חמצני (MMS מסורתי) בריכוזים שונים החוזרים על עצמם 5 פעמים
טבלה 3 משווה את הריכוזים של 1, 2, 3, 4 ו -5 עמודים לדקה בטבלה 3 משווה את הריכוזים של 1, 2, 3, 4 ו -5 עמודים לדקה לחשיפה של דקה חמצנית של דקה אחת. הבקרה הושוותה לניסוי לריכוזים השונים. עבור כל ריכוזים של כלור דו חמצני, שיעור העיכוב היה 1%.
ניסוי 2: שימוש ב- CDSplus
אותו ניסוי כאמור חזר על עצמו תוך שימוש בדור ה- CDS פלוס, תוך שימוש בריכוזים של 1-3 עמודים לדקה. בכל אחד מ -3 הריכוזים, שיעור העיכוב שוב היה 100%; ראה טבלה 4 ואיור 3. איור 3 מראה הדברת תאי MRSA באמצעות ריכוזים שונים של CDSplus, כלומר 1, 2 ו -3 עמודים לדקה. ספירת בסיס נמדדה עבור קבוצת הביקורת, ולאחר מכן נוספה כל ריכוז של CDS פלוס וחזר על עצמו פעמיים.
עבור כל הריכוזים, שיעור העיכוב היה 100%.
טבלה 4 משווה את הריכוזים של 1, 2 ו -3 עמודים לחשיפה של 60 שניות לכלור דו חמצני, באמצעות ה- CDS plus מהדור החדש.
הבקרה הושוותה לניסוי לריכוזים השונים.
איור 3 MRSA-CDSPlus עם ריכוזים שונים.
איור 4 משווה את ספירת תאי MRSA עם ריכוז כלור דו חמצני (CDS פלוס) למשך דקה אחת. השורה העליונה מציגה את ספירת תאי ההתייחסות עבור קבוצת הביקורת. השורה התחתונה מציגה את ספירת תאי MRSA לאחר חשיפת התאים במשך דקה אחת לריכוזים שונים של כלור דו חמצני; שיעור העיכוב היה 1%.
איור 4 ריכוז שונה של CDSPlus למשך 60 שניות.
טבלה 4 כלור דו חמצני (CDSplus) בריכוזים שונים לחשיפה של דקה אחת לוח 1 דו חמצני כלור (CDSplus) בריכוזים שונים לחשיפה של דקה אחת
מסקנות
MRSA הוא תכליתי ובלתי צפוי. יכולת ההסתגלות הגנטית שלהם ו- MRSA היא תכליתית ובלתי צפויה. כושר ההסתגלות הגנטי שלה והופעתם הסדרתית של זני מגיפה מוצלחים גורמים לכך שהיא נשארת איום גדול על בריאות האדם.
התמותה הגבוהה המתמשכת הקשורה לזיהום MRSA פולשני, למרות העובדה כי ה- FDA אישר מספר אנטיביוטיקה יעילה נגד MRSA מאז 2014, מדגיש את הצורך בניסויים באיכות גבוהה לקביעת הניהול האופטימלי לחולים אלה. בניסויים במבחנה אלה, היעילות של כלור דו חמצני נגד MRSA הודגמה בעקביות, עם עיכוב גדילה של 99,99% -100% אפילו בריכוזים הקטנים ביותר של 0,5 עמודים לדקה.
לאור הבטיחות המוכחת של כלור דו חמצני בניסויים בבעלי חיים ובני אדם עד כה, קיים צורך דחוף בניסויים קליניים איכותיים כדי לקבוע את יעילותו של כלור דו חמצני באנשים הנגועים ב- MRSA כיום.
מחקרים אלה יבוצעו על ידי הקהילה הקלינית, החל בניסויים קליניים בודדים במדינות שונות בעולם, עם יצירת רשת של ניסויים קליניים לאסוף את כל הנתונים ולפתח פרוטוקולים קליניים בטוחים ויעילים. באשר לבטיחות, בניסוי שתוכנן בקפידה, הזמן האופייני שנדרש להרוג חיידק נמצא כאלפיות שניות ספורות בלבד. מכיוון ש- ClO 2 הוא תרכובת נדיפה למדי, זמן המגע שלו (קביעותו על המשטח המטופל) מוגבל לכמה דקות.
למרות שהשהייה הזו בטוחה מספיק (להיות לפחות 3 סדרי גודל ארוכים יותר ממוות המוות) כדי להשבית את כל החיידקים ב
פני הגוף קצרים מדי מכדי ClO 2 לחדור עמוק יותר מכמה עשיריות של מילימטר; לכן הוא אינו יכול לגרום נזק ממשי לאורגניזם שהוא גדול בהרבה מחיידק.
ישנן גם עדויות רבות על השימוש בכלור דו חמצני על ידי מתנדבים אנושיים למיגור מחלות זיהומיות רבות, כולל מלריה ו- HIV, אך אחד מחלוצי אפריקה, ג'ים הומבל. קיימות מחלוקות רבות בנוגע לראיות אנקדוטיות אלה, אך אי אפשר להתעלם ממספר העדים המעידים: יש להפריש מפוליטיקה ואינטרסים אישיים ולדעת המדע לבחון את הראיות לטובת האנושות! 34,35
הפניות ומסמך מקורי מהקישור הבא:
