esarcsenfrdeiwhiitpt

Ликвидация MRSA с помощью диоксида хлора

MRSAИнфекции, устойчивые к противомикробным препаратам (УПП), в настоящее время уносят по меньшей мере 50.000 15 жизней каждый год только в Европе и США, а многие сотни тысяч умирают в других регионах мира. В 10 европейских странах более XNUMX% инфекций Staphylococcus aureus в кровотоке вызываются метициллин-резистентными штаммами (MRSA),

и в некоторых из этих стран уровень резистентности близок к 50%. 1 Кроме того, в то время как количество устойчивых к антибиотикам инфекций увеличивается, количество новых антибиотиков сокращается. 1,2 Следовательно, совершенно необходимо искать новые и новые методы лечения ADR, и это предпосылка этого исследования: использовать натуральные вещества для искоренения MRSA, которые не создают дополнительной устойчивости. Диоксид хлора, используемый in vitro, был основным объектом нашего исследования, поскольку он был наиболее эффективным по сравнению с другими протестированными натуральными веществами.

Ключевые слова: штаммы, устойчивые к противомикробным препаратам, устойчивые к метициллину, Staphylococcus aureu,

синдром токсического шока, эритромицин, диоксид хлора

 

Сокращения: MRSA, метициллин-устойчивый золотистый стафилококк; AMR. противомикробная стойкость; TSST-1, синдром токсического шока токсина-1; ClO 2, диоксид хлора, PVL, лейкоцидин Пантона-Валентайна; MSSA, метициллин-чувствительный saphylococcus aureus

 

Введение

Нозокомиальные инфекции, приобретенные в больницах или отделениях интенсивной терапии, часто вызываются устойчивыми к антибиотикам бактериями, такими как устойчивый к метициллину Staphylococcus Aureus (MRSA). Эта устойчивость к антибиотикам сопровождается высокими показателями заболеваемости, смертности и дороговизной медицинских учреждений.

Что такое MRSA?

Золотистый стафилококк - это грамположительный кокосовый орех, который одновременно является каталазой и коагулазой +. Staphylococcus aureus эволюционировал для разработки многочисленных стратегий иммунного избегания для борьбы со смертью, опосредованной нейтрофилами, включая активацию нейтрофилов, миграцию к месту инфекции, бактериальную опсонизацию, фагоцитоз и последующее опосредованное нейтрофилами разрушение. Известно до 40 молекул S. aureus, уклоняющихся от иммунитета, и определяются новые функции этих уклоняющихся белков.

Они производят множество токсинов, включая альфа-токсин, бета-токсин, гамма-токсин, дельта-токсин, эксфолиатин, энтеротоксины, лейкоцидин Пантона-Валентайна (PVL) и токсин токсического шока 1 (TSST-1); энтеротоксины и TSST-1 связаны с синдромом токсического шока; Прогрессирующая мультифокальная лейкоэнцефалопатия связана с некротическими инфекциями кожи и легких и является важным фактором вирулентности пневмонии и остеомиелита. 3

S. aureus выражает широкий спектр факторов вирулентности, включая:

токсины (гемолизины и лейкоцидины), иммуноэвазивные поверхностные факторы (например, капсула и белок А) и ферменты, способствующие проникновению в ткани (например, гиалуронидаза). 3

Колонизация MRSA увеличивает риск заражения, и заражающие штаммы совпадают с колонизирующими штаммами до 50–80% случаев. 4,5

Практически все, что контактирует с кожей, может служить фомитом в передаче MRSA, от пальто и белых галстуков до ручек и сотовых телефонов.

Колонизация может сохраняться в течение длительного времени. MRSA также может сохраняться в домашних условиях, затрудняя попытки искоренения. 6

В то же время колонизация не статична, поскольку было обнаружено, что штаммы развиваются и даже заменяются внутри одного и того же хозяина. 7

 

Устойчивость к лекарству

MRSA неоднократно приобретал MGE, несущий гены устойчивости к антибиотикам. Устойчивость к пенициллину (blaZ), триметоприму (dfrA и dfrK), эритромицину (ermC), клиндамицину (конститутивно экспрессируется ermC) и тетрациклинам (tetK и tetL) была идентифицирована в последовательностях вставки, транспозонах и иногда плазмидах в обоих MRSA, как в метициллин. Восприимчивый золотистый стафилококк (MSSA). 8 Вероятно, отражая сильное избирательное давление в условиях больницы, устойчивость к антибиотикам часто генетически связана с устойчивостью к дезинфицирующим средствам или тяжелым металлам (например, соединениям четвертичного аммиака, ртути или кадмию) среди штаммов HA-MRSA. 9

Что такое диоксид хлора?

В настоящее время коммерчески важный диоксид хлора (ClO 2) не является недавним открытием. Газ был впервые произведен Хамфри Дэви в 1811 году путем реакции соляной кислоты с хлоратом калия. В результате образовался «эухлор», как его тогда называли. Ватт и Берджесс, которые изобрели щелочное отбеливание целлюлозы в 1834 году, упомянули эухлор в качестве отбеливающего агента в своем первом патенте. 10,11

Позже диоксид хлора стал известен как отбеливатель, а затем как дезинфицирующее средство. Однако производство ClO 2 из минерального хлората сложно, а газ взрывоопасен, поэтому он не может

быть легко используемым практически до производства порошка хлорита натрия компанией Olin Corporation в 1940 году.

Теперь при необходимости из хлоритовой соли можно было выделять диоксид хлора. В муниципальных системах водоснабжения это обычно делается путем добавления хлора к раствору хлорита, а в лаборатории - путем добавления кислоты к раствору хлорита. Аллигер показал в 1978 г., 10,11, что
ClO 2 может наноситься местно индивидуальным пользователем.

 

ClO 2 представляет собой небольшую молекулу с молекулярной массой 67,46 и образует стабильный радикал. 12 ClO 2 - окислитель, который восстанавливается до хлорит-иона (ClO 2 -) за счет захвата электрона (ClO 2 + e- → ClO 2 -). Редокс-потенциал (Eº) относительно высок и составляет 0,95 В, поэтому он не наносит вреда микробиому человека. 13,14

 

Раствор диоксида хлора (ClO2)

Двуокись хлора обладает бактерицидным, вирулицидным, спороцидным, цистицидным, альгицидным и фунгицидным действием. 15 Диоксид хлора, сильный окислитель, как сообщается, подавляет или уничтожает микроорганизмы в концентрациях от 1 до 100 ppm, которые обладают мощной противовирусной активностью, инактивируя> или = 99,9% вирусов при обработке 15-секундной сенсибилизации.
15-19

Кроме того, ClO 2 может быстро удалять биопленки 20, поскольку он хорошо растворяется в воде и, в отличие от озона, не реагирует с
внеклеточные полисахариды из биопленок. Таким образом, ClO 2 может быстро проникать в биопленки, достигать и уничтожать микробы, живущие в пленке: большое преимущество, которое отличается от устранения обоих для естественного
и аллопатическая медицина. Есть много сообщений о том, что раствор ClO 2 обладает вирулицидной активностью. 21-25 Концентрация инактивации против

различных вирусов составляет 1-2 промилле в полиовирусе. 21,22 2,19 промилле в коронавирусе, вызывающем атипичную пневмонию. 23 7.5 частей на миллион у вируса гепатита А, 24 и 0,2 частей на миллион у ротавируса. 25

Безопасность диоксида хлора

Многие исследования показали, что соединения ClO 2 нетоксичны. Пять десятилетий использования не показали каких-либо неблагоприятных последствий для здоровья.

Основными областями использования были дезинфекция источников воды, удаление нежелательных привкусов и запахов, а также отбеливание в целлюлозно-бумажной и текстильной промышленности.

Токсикологические тесты включают попадание ClO 2 в питьевую воду, добавление к культуре тканей, инъекции в кровь, семена.
дезинфекция, 26,27 дезинфекция яиц насекомых, инъекции под кожу животных и в мозг мышей, ожоги более 1500 крыс и инъекции в стебли растений. Стандартные тесты включают мутацию Эймса, китайского хомяка, кроличий глаз, истирание кожи, фармакодинамику и тератологию. 28 год

В одном исследовании люди-добровольцы пили ClO 2 или ClO 2 ¯ в растворе с концентрацией до 24 частей на миллион и не показали никаких побочных эффектов. 28 год

В нескольких исследованиях изучалось влияние на репродуктивную токсичность или тератологию. Нет никаких свидетельств порока развития плода или рождения.
дефекты концентрации ClO 2, как в напитке, так и при попадании через кожу, до 100 ppm. 29–31

При длительном кормлении токсичность проявляется в основном в эритроцитах. Крысы, получавшие 1000 мг / л хронически в течение 6 месяцев, не показали значительных гематологических изменений. Однако через 9 месяцев количество эритроцитов, гематокрит и гемоглобин снизились во всех группах лечения.

Отсутствие долгосрочной токсичности при низком исходном уровне наглядно проиллюстрировано в двух отдельных исследованиях, в которых 32 крысы и 33 пчелы кормили ClO2 в высоких дозах в течение двух лет. При добавлении в воду до 100 ppm вредных эффектов не наблюдалось.

материалы и методы

В этом исследовании использовался устойчивый к метициллину Staphylococcus aureus (MRSA), выращенный на чашках с кровяным агаром, которые были предоставлены местной сертифицированной клинической лабораторией.

Культура MRSA

В шкафу класса безопасности 2 из чашек с кровяным агаром (колумбийский агар) отбирали образец MRSA из изолированных культур с помощью стерилизованной петли и помещали в стерильные пробирки с 5 мл триптического соевого бульона (TSB). Эти культуральные пробирки инкубировали при 37 градусах Цельсия в течение 48 часов. Эти культуральные пробирки можно было хранить в холодильнике при 4 градусах Цельсия до 10 дней, для чего снова должны были быть взяты образцы.

Подсчет бактерий

Одним из наиболее распространенных методов количественного определения бактерий является подсчет колониеобразующих единиц (КОЕ). Этот широко используемый метод прост, дает хорошее общее представление о жизнеспособности клеток и чувствителен даже к низким концентрациям бактерий.

Одним из больших недостатков является то, что для получения результатов, которые в лучшем случае являются приблизительными, требуются дни. Колония может возникать из одной или тысячи клеток, и подготовка образцов может варьироваться от технологии к технологии, а также каждый раз в зависимости от условий образца. Для точности в этом исследовании использовался счетчик микробных клеток QUANTOMTx от Logos Biosystems (logosbio.com). Это автоматический счетчик клеток на основе изображений, который может идентифицировать и подсчитывать отдельные бактериальные клетки за считанные минуты.

QUANTOM Tx автоматически фокусирует, захватывает и анализирует несколько изображений окрашенных флуоресценцией клеток для обнаружения бактериальных клеток с высокой чувствительностью и точностью. Он содержит сложный алгоритм обнаружения и удаления клеток, который может точно идентифицировать отдельные бактериальные клетки даже в самых маленьких группах. В этих экспериментах мы используем набор для окрашивания жизнеспособных клеток для обнаружения живых или жизнеспособных клеток.

Счетчик микробных клеток Quantom был сравнен и оказался таким же точным, как измерения проточной цитометрии и гемоцитометра, но значительно сокращает время, поскольку каждый подсчет занимает не более 30 секунд и может различать группы. Окрашенные клетки смешивают с буфером для загрузки клеток QUANTOM I, загружают на слайды для подсчета клеток QUANTOM M50 и центрифугируют в центрифуге QUANTOM для иммобилизации и равномерного распределения клеток вдоль одной фокальной плоскости для обеспечения последовательного точного обнаружения клеток. Результаты подсчета и изображения можно просмотреть и сохранить сразу после подсчета.

Для приготовления образца для Quantom 10 микролитров (мкл) культуральной среды были взяты с помощью предварительно откалиброванной электронной пипетки DLAB и помещены в стерильную пробирку Эппендорфа на 1,5 мл. К этому добавляли 2 мкл окрашивающего красителя для жизнеспособных клеток и инкубировали в инкубаторе Heraeus при 37 градусах Цельсия в течение 30 минут. К этому образцу добавляли 8 мкл буфера для усиления сигнала флуоресценции. Чтобы сэкономить на расходных материалах для слайдов Quantom, мы утилизируем слайды, промывая их в системах очистки слайдов Imrali Inventions iWash® (www.imraliinventions.com).

Добавляли ли в эти пробирки диоксид хлора в разных концентрациях на разное время? Концентрация диоксида хлора составляла от 0,5 мкл (0,5 частей на миллион) до 5 мкл (5 частей на миллион), а продолжительность воздействия на образец составляла от 30 минут до 30 секунд.

Для каждого эксперимента, основанного на времени и продолжительности, были подготовлены две пробирки для образцов, чтобы поддерживать постоянный коэффициент разбавления. В зависимости от количества диоксида хлора, добавленного в экспериментальную пробирку, в контрольную пробирку добавляли такое же количество воды.

Из этих контрольных и экспериментальных пробирок с помощью электронной пипетки отбирали 6 мкл образца и помещали на предметные стекла для подсчета клеток M50. Слайды помещали в центрифугу QUANTOM на 8 минут при 300 RCF (относительная центробежная сила), а затем помещали в счетчик микробных клеток Quantom для проведения контрольного измерения (контроля) и другого измерения из экспериментальной пробирки.

Оптимальная конфигурация счетчика микробных клеток Quantom для протокола MRSA, которую мы обнаружили во время теста, была установлена ​​в Факторе разбавления 2, минимальном размере флуоресцентного объекта 0.4 мкм, максимальном размере флуоресцентного объекта 15 мкм, округлости 50%, уровне декластеризации 7 и Чувствительность обнаружения 7.

Приготовление диоксида хлора

 

Традиционный диоксид хлора, называемый MMS, был приготовлен как Традиционный диоксид хлора, называемый MMS, был приготовлен в виде раствора с использованием двух компонентов: раствора хлорита натрия (25% раствор в воде) и 4% раствора соляной кислоты. По одной капле каждого из этих растворов помещали в стерильную пробирку Эппендорфа на 1,5 мл и давали возможность активироваться в течение 30 секунд. Кроме того, было проведено больше экспериментов с использованием нового поколения диоксида хлора под названием CDSplus, запатентованного продукта, производимого Aquarius Pro-Life в качестве продукта для очистки воды. Это забуференная форма диоксида хлора со стандартным pH 7 и концентрацией 3000 ppm в активном состоянии (250 мл). Из активированного CDSplus (250 мл) экстрагировали 83 мкл = 1 ч / млн, 166 мкл = 2 ч / млн; 0,25 мл = 3 частей на миллион.

 

Протоколы экспериментов

Различные концентрации диоксида хлора

Использовались MMS и CDSplus. Диапазон составлял от 1 до 5 частей на миллион. Использовалось время MMS и CDSplus. Диапазон составлял от 1 до 5 частей на миллион. Время воздействия диоксида хлора составляло от 30 минут до 30 секунд. В первоначальных экспериментах не было ясно, сколько времени потребуется для ингибирования, но быстро было показано, что оно составляет менее минуты воздействия. Поэтому в большинстве экспериментов время экспозиции составляло 1 минуту.

Результаты Первоначальные эксперименты

Мы начали принимать различные концентрации диоксида на основе хлора в традиционных MMS и тестировали эти концентрации с MRSA в растворе в течение разного времени в диапазоне от 30 минут до 30 секунд. 1 мкл диоксида хлора соответствует концентрации 1 ppm. Самая низкая концентрация диоксида хлора, используемая для полного уничтожения MRSA в этих экспериментах, составляла 0,5 частей на миллион при времени воздействия 30 секунд.

В таблице 1 ниже показаны различные концентрации в зависимости от времени, причем концентрация клеток MRSA измеряется счетчиком клеток Quantom. Как вы можете видеть, для всех концентраций диоксида хлора от 1 до 5 частей на миллион и времени воздействия от 30 минут до 30 секунд ингибирование роста MRSA составляло 99,99% во всех этих экспериментах.

 

Таблица 1 Сравнение количества бактерий до и после воздействия диоксида хлора.

 

Эксперимент 1

В таблице 2 показаны числа клеток для 6 использованных концентраций диоксида хлора, а именно: использовались 0,5, 1, 2, 3, 4 и 5 частей на миллион, и для каждой концентрации измеряли исходное количество. Номер эксперимента 0 - это исходный (контрольный) счет для каждой экспериментальной группы с использованием различных концентраций диоксида хлора. Для каждой концентрации эксперимент повторяли 5 раз с указанием средних концентраций.

Исходя из первоначальных экспериментов, поскольку было обнаружено, что диоксид хлора убивает 99,99% бактерий MRSA при концентрациях 5 ppm всего за 30 секунд, во всех других экспериментах в качестве стандарта использовалось время воздействия в одну минуту, в то время как они пробовали разные концентрации.

В этом эксперименте концентрации ClO2 в диапазоне от 0,5

  • Было получено 5 ppm с использованием традиционного MMS. При каждой из 5 концентраций степень ингибирования составляла 100%; см. Таблицу 2 и Рисунок
  1. На рисунке 1 показана повторяемость подсчета бактерий MRSA при различных концентрациях в диапазоне от 1 до 5 частей на миллион. Для каждой концентрации проводился исходный подсчет; это было повторено 5 раз. Во всех 5 повторах ингибирование роста MRSA составляло 100%.

На рисунке 2 показано сравнение количества клеток MRSA с концентрацией MMS в течение 1 минуты. Покрытая площадь равна количеству клеток. Начальные подсчеты для каждой концентрации отображаются в левой части графика, а окончательные значения отображаются в правой части графика. Степень ингибирования составляла 100% для всех концентраций диоксида хлора при времени воздействия 1 минута.

 

Рисунок 1 Диоксид хлора в различных концентрациях с использованием MMS

 

 

Рисунок 2 Различные концентрации традиционных MMS в течение 1 мин.

Таблица 2 Диоксид хлора (традиционный MMS) при различных концентрациях, повторенный 5 раз

 

 

В таблице 3 сравниваются концентрации 1, 2, 3, 4 и 5 частей на миллион, а в таблице 3 сравниваются концентрации 1, 2, 3, 4 и 5 частей на миллион для 1-минутного воздействия диоксида хлора. Контроль сравнивали с экспериментальным для разных концентраций. Для всех этих концентраций диоксида хлора степень ингибирования составляла 100%.

 

Эксперимент 2: использование CDSplus

Тот же эксперимент, что и выше, был повторен с использованием генерации CDS plus, используя концентрации 1-3 ppm. При каждой из 3 концентраций степень ингибирования снова составляла 100%; См. Таблицу 4 и рисунок 3. На рисунке 3 показано уничтожение клеток MRSA с использованием различных концентраций CDSplus, а именно 1, 2 и 3 частей на миллион. Для контрольной группы измеряли исходное количество, затем добавляли каждую концентрацию CDS plus и повторяли дважды.

Для всех концентраций степень ингибирования составляла 100%.

В таблице 4 сравниваются концентрации 1, 2 и 3 pp для 60-секундного воздействия диоксида хлора с использованием нового поколения CDS plus.

Контроль сравнивали с экспериментальным для разных концентраций.

 

Фигура 3 MRSA-CDSPlus с разными концентрациями.

 

На рисунке 4 сравнивается количество клеток MRSA с концентрацией диоксида хлора (CDS plus) в течение 1 минуты. В верхней строке показано количество контрольных ячеек для контрольной группы. В нижней строке показано количество клеток MRSA после воздействия на клетки в течение 1 минуты различных концентраций диоксида хлора; степень ингибирования составляла 100%.

 

 

Рисунок 4 Различные концентрации CDSPlus в течение 60 секунд.

Таблица 4 Диоксид хлора (CDSplus) при различных концентрациях для 1-минутной экспозиции Таблица 4 Диоксид хлора (CDSplus) при различных концентрациях для 1-минутной экспозиции

 

Выводы

MRSA универсален и непредсказуем. Их генетическая адаптивность и MRSA универсальны и непредсказуемы. Его генетическая адаптивность и серийное появление успешных эпидемических штаммов означают, что он остается серьезной угрозой для здоровья человека.

Постоянно высокая смертность, связанная с инвазивной инфекцией MRSA, несмотря на тот факт, что FDA одобрило несколько антибиотиков, эффективных против MRSA с 2014 года, подчеркивает необходимость высококачественных испытаний для определения оптимального лечения этих пациентов. В этих экспериментах in vitro постоянно демонстрировалась эффективность диоксида хлора против MRSA с подавлением роста 99,99% -100% даже при самых малых концентрациях 0,5 ppm.

Учитывая доказанную безопасность диоксида хлора в экспериментах на животных и людях на сегодняшний день, существует острая необходимость в высококачественных клинических испытаниях для определения эффективности диоксида хлора у людей, инфицированных MRSA.

Эти исследования будут проводиться клиническим сообществом, начиная с отдельных клинических испытаний в разных странах мира, с создания сети клинических испытаний для сбора всех данных и разработки безопасных и эффективных клинических протоколов. Что касается безопасности, в тщательно разработанном эксперименте было обнаружено, что характерное время, необходимое для уничтожения микроба, составляет всего несколько миллисекунд. Поскольку ClO 2 является довольно летучим соединением, время его контакта (его стойкость на обрабатываемой поверхности) ограничено несколькими минутами.

Хотя это пребывание достаточно безопасно (как минимум на 3 порядка дольше, чем время смерти), чтобы инактивировать все бактерии в
поверхность тела слишком коротка, чтобы ClO 2 мог проникнуть глубже нескольких десятых миллиметра; следовательно, он не может причинить реального вреда организму, который намного больше, чем бактерия. 

 

Есть также много свидетельств использования диоксида хлора людьми-добровольцами для искоренения многих инфекционных заболеваний, включая малярию и ВИЧ, но один из пионеров в Африке, Джим Хамбл. Есть много споров по поводу этих анекдотических свидетельств, но нельзя игнорировать количество свидетелей, которые дают показания: политика и личные интересы должны быть оставлены в стороне, а наука должна исследовать доказательства на благо человечества! 34,35

 

Ссылки и исходный документ по следующей ссылке:

 

MRSA

PDF

Ликвидация MRSA с помощью диоксида хлора

Размер: 651.44 KB
Хиты : 2632
Дата Добавлена: 25-08-2021


легальность

Рекомендуемые ссылки

Контакты

Если вы хотите, вы можете связаться со мной по электронной почте для получения любой другой информации, которая не отображается на этом веб-сайте.

последние известия

Социальные сети

Из-за многочисленных порицаний, полученных со стороны социальных сетей и видеоплатформ, это варианты распространения доступной информации.

Вестник ЕАТА

По любым вопросам, связанным с диоксидом хлора, обращайтесь на форум Forbidden Health, также доступный по адресу Приложение для Android.

Не забудьте подписаться на нашу новостную рассылку на предпочитаемом вами языке, чтобы получать важные уведомления, связанные с терапией диоксидом хлора.

© 2023 Андреас Калькер - Официальный сайт.